基于核酸的檢測(cè),本質(zhì)上是直接采集病毒本體,通過(guò)RT-PCR的方式直接檢測(cè)病毒的基因組。只需要知道病毒的基因序列,就可以很快的設(shè)計(jì)出探針。國(guó)內(nèi)可非常非常多,檢測(cè)時(shí)用的其他的試劑,都是通用的,生產(chǎn)也非常方便,國(guó)內(nèi)存貨非常多,但是為了使用方便還是會(huì)在試劑盒里面配套(其實(shí)不配套問(wèn)題也不大,試劑很好找)。因此基于核酸的病毒檢劑盒可以在病毒基因組測(cè)序完成(甚至部分完成)的數(shù)小時(shí)內(nèi)完成設(shè)計(jì),然后在當(dāng)天內(nèi)啟動(dòng)大規(guī)模生產(chǎn),而且檢測(cè)精度非常高。
核酸檢測(cè)的步驟如下:
采集樣本(咽拭子,鼻拭子):如果病毒藏在下呼吸道,很有可能采集不到。分離核酸,提取total RNA(不難,但是需要有經(jīng)驗(yàn)的人操作,新手容易出問(wèn)題,而且臨床上提取RNA的操作很少,很多檢驗(yàn)人員不會(huì))。使用Trizol法操作時(shí)間大約3.5小時(shí),使用吸附柱法1.5-2小時(shí)可以完成。使用試劑盒和qPCR儀對(duì)病毒RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和RT-PCR,可以直接輸出結(jié)果,時(shí)間大約1.5小時(shí)。
一般第3步,是不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或者假陰性,RT-PCR的技術(shù)已經(jīng)非常成熟,而且在檢測(cè)時(shí)一般會(huì)做三個(gè)重復(fù)。檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的假性結(jié)果一般出現(xiàn)在一步和二步,也就是沒(méi)有成功采樣,或者分離核酸失敗。
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